本发明属于基因工程领域,涉及一种新型嗜盐古菌亚硝酸盐还原酶的制备方法及其应用;步骤为:首先基于嗜盐古菌(Haloterrigena sp.)KZCA68‑1的基因组获得编码基因nirKHtg;通过分子克隆技术将nirKHtg连接到载体上构建重组质粒;将重组质粒转化嗜盐古菌宿主,得到转化后的重组宿主细胞在Hv‑YPC液体培养基中培养至稳定期后低温离心收集菌体,于细胞裂解液中进行重悬,经超声破碎、离心收集上清液,用于重组蛋白纯化;采用镍亲和层析纯化以及凝胶过滤层析纯化后,获得高纯度还原酶,记为NirKHtg。本发明得到的NirKHtg具有良好的酶学特性,高盐腌制食品、废水处理等过程中降解亚硝酸盐。
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