本申请公开了一种制备腺苷酰化接头的方法,包括:(1)先合成一段寡核苷酸,寡核苷酸5’端磷酸化修饰,3’端进行氨基修饰、双脱氧胞嘧啶、磷酸修饰、荧光标记修饰、倒转碱基修饰或生物素标记修饰中的一种;(2)将步骤(1)的寡核苷酸在非截短型的T4RNA连接酶1催化下与ATP反应,获得腺苷酰化接头。本申请的制备方法,打破传统化学合成腺苷酰化接头的思维限制,先合成寡核苷酸,T4RNA连接酶1将ATP分解成AMP,AMP转移到磷酸上,形成腺苷酰化,由于3’端修饰,寡核苷酸保持在腺苷酰化中间态,从而制备出腺苷酰化接头。本申请的制备方法成本低、效率高,能满足使用需求,有效的降低了RNA高通量测序的成本。
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