本发明涉及一种大规模提取去除内毒素的质粒的方法,包括先通过经典碱裂解法获得粗分离的质粒DNA,然后依次加入异丙醇、NH4Ac溶液、RNase A、NaCl,再加入PEG6000和NaCl的混合溶液,期间使用TE溶液溶解沉淀,通过无水乙醇重新沉淀,通过70%乙醇洗涤沉淀并配合离心操作,干燥后最终用TE溶液溶解沉淀,获得目的质粒。本发明能很好的去除内毒素对质粒DNA的污染,本发明所使用的所有试剂均为实验室常备的化学试剂,操作方法简洁,易于掌控,适合大规模质粒的提取。本发明所获得的质粒浓度可达5mg/mL,且内毒素低于5EU/μg,质粒可用于酶切、DNA序列的测序、细胞转染、病毒包装以及临床动物免疫实验。
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