本发明属于生物化学技术领域,具体涉及一种TGFβR1(T204D)酶活性的快速检测方法及其应用。检测方法为:(1)取待测样品、空白对照品、阳性对照品分别与TGFβR1(T204D)酶、TGFβR1底物/ATP混合液共孵育进行激酶反应产生ADP;(2)向步骤(1)的三组激酶反应体系中分别添加ADP‑Glo
TM反应试剂共孵育,终止激酶反应并消耗完剩余ATP;(3)向步骤(2)的三组反应体系中分别添加激酶检测试剂共孵育,使ADP转化成ATP,并读取新合成的ATP的发光值RLU;(4)按酶活=(RLU(Sample)‑RLU(Blank))/(RLU(Pos.Ctrl)‑RLU(Blank))×100%计算TGFβR1(T204D)酶活。该方法基于ADP‑Glo
TM激酶实验,直接测定反应中消耗的ATP来定量反应的进程。完成全部实验只需一天,大大缩短了检测时间。该方法可应用于TGFβR1(T204D)受体抑制剂和此靶点相关的抗肿瘤药物的筛选。
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