本发明公开了一种利用CRISPR/Cas9实现非模式生物小菜蛾APN3a基因的敲除及其在Bt Cry1Ac杀虫蛋白抗性分子机制研究中的应用。所述CRISPR/Cas9基因编辑系统主要包括:小菜蛾APN3a基因特异性sgRNA靶标序列、小菜蛾卵的显微注射方法和突变个体及其基因型的无损检测方法。将构建的可稳定遗传的小菜蛾APN3a基因纯合突变种群用于Bt Cry1Ac杀虫蛋白毒力生物测定,结果证实小菜蛾APN3a基因突变可以导致其对Bt Cry1Ac杀虫蛋白产生高抗性。本发明对于小菜蛾Bt Cry1Ac抗性的功能基因筛选、田间抗性水平检测以及田间防治均具有重要的理论和实践意义,应用前景广泛。
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