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L-半胱氨酸转运蛋白突变体及其在生产L半胱氨酸中的应用

856   编辑：管理员   来源：中冶有色技术网  
2023-03-19 08:57:04
本发明涉及一种L‑半胱氨酸转运蛋白突变体制备方法，其方法步骤包括：⑴A31V突变体的获得，以SEQIDNO.2核苷酸序列为模板，SEQIDNO.3、SEQIDNO.4为引物，进行PCR得到的突变体基因eamBA31V；⑵将突变体基因eamBA31V与PMW118质粒分别用EcorI,XbaI双酶切，酶切产物纯化后用T4连接酶22℃连接12小时，连接产物用化学转化法转化DH5α感受态细胞，涂布于含氨苄氯霉素的LB固体平板上，37℃过夜培养；⑶对固体培养基上长出的单菌落用PMW118通用引物M13F、M13R进行菌落PCR，将PCR产物测序，验证正确的单菌落扩大培养，提取质粒PMW118‑eamB‑A31V。本发明同时将L‑半胱氨酸转运蛋白突变体应用于产L‑半胱氨酸大肠杆菌工程菌株，可使大肠杆菌对L‑半胱氨酸耐受性提高1.78倍，L‑半胱氨酸产量提高18％。
声明：
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