本发明公开了一种有效表达色氨酸合成酶的新型表达载体及其应用,其表达载体构建步骤为:一、以大肠杆菌K‑12为模板PCR扩增trpBA基因,纯化后连接到pCold I载体上,得到重组质粒trpBA‑pCold I,二、设计引物P
敲除lacO‑F/P
敲除lacO‑R,以trpBA‑pCold I质粒为模板进行全质粒PCR,产物经Dpn I处理后转化大肠杆菌,再进行质粒扩增、培养、测序,得到敲除lacO序列的新重组质粒,再对新重组质粒的cspA启动子进行随机突变并转化大肠杆菌经扩增、培养、测序、筛选得到有效表达色氨酸合成酶的新型表达载体。该方法能够避免化学诱导剂的使用,不需要调整发酵温度,从而有效降低色氨酸合成酶的生产成本,且为进一步研究启动子对基因表达的影响提供了理论基础。
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