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快速比较未纯化融合酶及其突变体比活性的方法

713   编辑：管理员   来源：中冶有色技术网  
2023-03-19 08:14:37
一种快速比较未纯化融合酶及其突变体比活性的方法，(1)用寡聚组氨酸或类似标签融合表达酶及其突变体，制备诱导表达细胞裂解液为未纯化融合酶样品；(2)固定化抗标签单抗或其它亲和分离介质；(3)所有测定中所用固定化亲和分离介质的结合容量相同；(4)用来自相同未纯化融合酶样品的不同总蛋白量与固定化亲和分离介质反应，分离结合的融合酶测定其活性，获得结合的融合酶活性对反应体系总蛋白量的响应曲线；(5)据亲和反应的化学计量学建立上述响应的数学模型，用单抗为亲和分离介质时所用融合酶远多于固定化单抗结合容量而适用简化模型，用Ni2+-NTA需用非简化模型，预测结合的融合酶最大活性作为比活性的等效量进行比较。
声明：
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