本文公开了采用两步化学发光反应的化学发光测试方法、组合物、试剂盒和化学发光的9,10-二氢化吖啶化合物。该反应包括9,10-二氢化吖啶化合物,优选N-烷基-9,10-二氢化吖啶-9-羧酸,在使得中间体化合物能积累的时间、温度和pH条件下,与过氧化物、过氧化物酶和增强剂进行反应,随后通过提高pH诱发突然发光。结果是通过这一反应产生极高强度的光。在免疫测试、DNA探针测试或其它凡是水解酶与受体分子结合的测试中,该过氧化物酶是单独存在或与一种特定结合对的一个成员相连的。由于孵育和发光步骤的分离,因而这一方法特别适用于自动测试。
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