本发明涉及生物化学领域,尤其涉及一种制备环孢菌素D的闭路循环高速逆流色谱方法。本发明改装了常规逆流色谱仪器,在检测器和恒流泵之间增加一个六通阀,使得流动相可以实现闭路循环,在实现柱体积的无限延长的同时,找到了合适的溶剂体系,从而实现从粗体物中一步分离制备到高纯度的环孢菌素D,所述的溶剂体系由正己烷、乙腈、水组成,其用量体积比为10:10:(0~1)。本方法具有操作简单,分离量大,纯度高,耗时短,大大节约有机溶剂的优点。
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