本发明公开了一种L‑苏氨酸转醛酶突变体的高通量快速筛选方法,属于生物化学和酶工程领域。本发明取乙醛及乙醇脱氢酶反应液,随即置于酶标仪中检测OD
340nm随时间的变化情况,计算OD
340nm下降的平均反应速率V
OD340nm,以乙醛浓度为自变量x,V
OD340nm为因变量y,得到回归方程y=ax,以及乙醛标准曲线。转醛反应液、L‑苏氨酸转醛酶突变体全细胞反应液,充分混匀反应结束后,离心除去细胞沉淀,取上清液和乙醇脱氢酶反应液,随即置于酶标仪中检测OD
340nm随时间的变化情况,计算OD
340nm下降的平均速率V
OD340nm;通过V
OD340nm计算得到反应液中乙醛的浓度,以乙醛浓度的高低来筛选L‑苏氨酸转醛酶突变体。本发明不受反应液中的杂质干扰,灵敏度和准确性高,重复性好,操作简便,便于推广应用。
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