一种提高肽碎片化的方法,通过用胍基或其他碱性官能团在C末端标记肽并且在多肽测序期间区分同量异序氨基酸和以下氨基酸组合:天门冬酰胺和甘氨酸‑甘氨酸;谷氨酰胺和甘氨酸‑丙氨酸;和/或谷氨酰胺和丙氨酸‑甘氨酸。该方法包括:获得感兴趣的肽和/或用如胃蛋白酶、糜蛋白酶或胰蛋白酶之类的蛋白酶水解或通过化学切割感兴趣的多肽以产生较短的肽;将获得和/或产生的肽与使肽的游离C末端羧酸官能衍生化的偶联剂反应,因而添加使C末端肽碎片离子通过质谱可检测的碱性官能团;选择2+或更多的荷电状态,且在质谱仪中在对于产生至少w离子有效的条件下使衍生化的肽碎片化;和通过质谱检测w离子,且鉴别掺入碱性官能团的额外质量的衍生化的肽。
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