本发明为基因重组的毕赤酵母及其在发酵制备芸苔素内酯中的应用,解决了化学合成芸苔素内酯反应过程需强氧化剂及还原剂参与,工艺复杂,环境污染大的问题。提取油菜植株各器官的总RNA,经逆转录和PCR技术得到
CYP90B1、
CYP90C1、
CYP85A2三个基因的PCR产物,将PCR产物分别克隆到pGEM‑Teasy载体,测序分析得到正确的基因序列。含目的基因的克隆载体经相应的内切酶酶切后连接到表达载体pPICZα‑A上,测序分析得到三种重组的表达载体,三种重组表达载体同时转化同一目标菌毕赤酵母X33,拉丁文名:
Pichia pastoris,保藏单位:中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏日期:2017年5月27日,保藏编号:CGMCC No.14204。
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