本发明涉及一种脲酶米氏常数测试方法即脲酶-酚红法,属于生物化学和应用酶学技术领域。本发明所提供的测试方法是以一系列不同浓度的尿素溶液为底物,酚红为指示剂,在脲酶的作用下,尿素分解产氨,pH值上升,在酚红指示剂的作用下,体系的颜色变深,吸光度增加,用分光光度计或酶标仪测吸光度。酶促反应速率与吸光度值的增加成正比,因此可以用吸光度增加值的倒数1/△A代替双倒数方程1/V=Km/(Vmax[S])+1/Vmax中的1/V,对底物尿素浓度的倒数1/[S]作图,根据双倒数方程可得直线在X轴上的截距即为-1/Km,求得Km值。
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