本发明属生物化学与分子生物学领域,涉及蛋白体外SUMO化修饰快速检测试剂盒,尤其涉及克隆和原核表达SUMO化修饰系统的E1,E2,E3以及SUMO‑1和SUMO‑2分子,以及应用于人源蛋白体外SUMO化修饰验证。本发明中使用大肠杆菌原核表达并纯化SUMO化E1酶AOS‑Uba1,E2酶Ubc9,E3酶KAP1以及SUMO‑1和SUMO‑2分子,在合适的反应缓冲液、时间、温度和蛋白浓度配比下,对特定的SUMO E3连接酶或是蛋白底物进行体外SUMO化修饰。该试剂盒可以方便、准确地鉴定底物蛋白是否具有SUMO化修饰,能被广范围应用于SUMO化修饰验证实验。
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