本发明公开了一种基于恒温无酶多级扩增的miRNA化学发光检测试剂盒,通过核酸互补杂交,目标miRNA特异性地打开发卡探针,发生催化发卡自组装反应,生成大量双链DNA产物,双链产物继续引发杂交链式反应,形成含有多个G‑四链体的DNA纳米线,G‑四链体与氯化血红素结合形成具有类辣根过氧化物酶催化活性的G‑四链体/氯化血红素DNAzyme。在过氧化氢的存在下,DNAzyme催化鲁米诺的氧化反应,产生多级扩增的化学发光信号。本发明试剂盒可以检测低至16 pM的miRNA;该检测方法无需荧光基团修饰、外部光源和蛋白酶介入,通过多级扩增反应即可有效提高miRNA检测的灵敏度,从而解决了现有检测方法由于自发荧光、荧光漂白、串光以及稳定性低导致的灵敏度有限的难题。
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