本发明公开了基于外周血的NK细胞体外培养方法,包括以下步骤:取用外周血和B958细胞备用,利用外周血经分离液处理后获得PBMC细胞,利用B958细胞获得含有EB病毒颗粒的EBV上清液,将所得PBMC细胞利用EBV上清液转化为永生化EBV‑LCL细胞,利用所得PBMC细胞经磁珠分选分离获得纯化后的NK细胞,将NK细胞经原代培养后置于无血清培养基中进行传代培养,获得增殖后的NK细胞。本发明的有益效果是:利用B958细胞制备含有EB病毒颗粒的EBV上清液,获得永生化EBV‑LCL细胞,使得NK细胞具有无限增殖能力,同时具有较强的杀伤肿瘤细胞的能力,NK细胞的扩增采用无血清培养基,避免血清源性污染以及避免血清批次间的质量变动,提高细胞培养和实验结果的准确性。
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