本发明涉及药物化学领域,具体公开了一种利用HTRF技术筛选UBC12/Dcn1小分子抑制剂的方法。该方法先成功构建并原核表达纯化得到纯度较高的GST‑Dcn1重组蛋白,合成UBC12 N末端乙酰化修饰的1‑12个氨基酸序列作为底物。用分子间相互作用确定UBC12和Dcn1有活性并且能相互作用;然后再利用HTRF技术建立优化的UBC12/Dcn1活性测定平台。该反应体系稳定,可耐受较宽的pH范围(5.5‑8.0)及二价金属离子、螯合物等;背景低,受到样品的干扰非常少,假阳性假阴性均低,可去除天然产物自发荧光的干扰,灵敏度高;易于实现微型化,通量高。
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