本发明公开了生产MSTN双侧基因敲除的双肌性状体细胞克隆猪的方法,其利用高效简便的基因修饰技术TALEN技术,设计构建能高效敲除MSTN基因的质粒;通过电转染法转染猪胎儿成纤维细胞,磁珠分选阳性细胞作为供体细胞,化学辅助去核方法去核后进行体细胞核移植;经胚胎移植确定妊娠后26-36天取出胎儿进行基因测序,以MSTN双侧基因敲除胎儿细胞作为供体细胞再次体细胞核移植,胚胎移植;足月分娩后免疫组化及形态学观察,确定为双肌性状克隆猪。获得MSTN-/-双侧敲除的双肌性状克隆公猪,取精液对发情母猪进行人工受精,获得大量双肌猪。本发明工艺简单,易于实施,且可产业化生产双肌猪,利于农业生产和医学研究。
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