本发明涉及生物化学与分子生物学领域。具体而言,特指一种从人体细胞众多E3中查找出特异性识别靶蛋白泛素连接酶E3和调控靶蛋白泛素化反应的E2/E3系统的方法。该方法是先建立体外泛素化分析系统,通过已知的泛素活化酶E1和以HelaS100馏分作为E3源,筛选出介导靶蛋白泛素反应的结合酶E2;再采用多重层析柱组合,结合质谱分析,从人体细胞中查找特异性识别靶蛋白的泛素连接酶E3和调控靶蛋白泛素化修饰的E2/E3系统。通过这种方法,可以方便、准确地查找出识别靶蛋白的底物识别因子-泛素连接酶E3;建立介导靶蛋白泛素化修饰的E2/E3调控系统。
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