本发明公开了一种维生素K环氧化物还原酶体外活性测定方法及其应用,属于生物化学技术领域。在维生素K循环中,γ‑谷氨酸羧化酶(GGCX)利用二氢维生素K(KH
2)为辅因子催化凝血因子Gla结构域的谷氨酸残基γ羧基化,同时把KH
2转化为维生素K环氧化物(KO);维生素K环氧化物还原酶(VKOR)催化KO到K,以及K到KH
2,使维生素K可以循环利用。本发明的检测原理是利用产物KH
2在250nm的激发光下可以产生荧光的特性,通过检测产物KH
2的生成量来反映VKOR蛋白的活性;该方法步骤简单,可操作性强,相较传统微粒体法可以快速、实时、高通量地检测VKOR蛋白催化KO或K的活性;采用该方法可有效筛选出靶向VKOR的小分子抑制剂。
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