本发明属生物化学与分子生物学领域,具体涉及一种蛋白体外泛素化修饰快速检测试剂盒,尤其是克隆和原核表达泛素化修饰系统的E1,E2与泛素分子,以及应用于人源蛋白体外泛素化修饰验证。本发明中使用大肠杆菌原核表达并纯化泛素化E1酶Uba1,E2酶Ubc5a和泛素分子GST‑ubiquitin,在合适的反应缓冲液、时间、温度和蛋白浓度配比下,可以对特定的泛素E3连接酶或是蛋白底物进行体外泛素化修饰。该试剂盒可以方便、准确地鉴定底物蛋白是否具有泛素化修饰,能被广范围应用于泛素化验证实验。
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