本发明公开了一种氨基糖苷类双功能修饰酶AAC(6′)‑APH(2″)抑制剂的筛选方法,包括如下步骤:采用化学法进行aac(6′)‑aph(2″)的基因合成,表达并纯化氨基糖苷类双功能修饰酶AAC(6′)‑APH(2″);建立氨基糖苷类双功能修饰酶AAC(6′)‑APH(2″)的体外反应体系,将待筛选物质与氨基糖苷类抗生素和辅酶因子进行混合,加入氨基糖苷类双功能修饰酶AAC(6′)‑APH(2″)使之反应,同时设立空白对照组,用水代替待筛选物质;采用内标法对反应产物进行高效液相分离和质谱定量检测;计算抑制率,筛选出对氨基糖苷类双功能修饰酶AAC(6′)‑APH(2″)具有抑制作用的活性物质。本发明公开的方法操作简单、灵敏度高、可重复性强,假阳性概率低。样品前处理简单,检测结果直观,大大提高了筛选AAC(6′)‑APH(2″)抑制剂的速度和成功率,可以对大批量样品库进行筛选,更具实用性。
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